[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 17، شماره 2 - ( تابستان 1398 ) ::
جلد 17 شماره 2 صفحات 0-0 برگشت به فهرست نسخه ها
همسانه سازی، بهینه سازی شرایط بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب Nef-MPER-V3 ویروس HIV-1 در سیستم بیانی پروکاریوتی
اقای احمد فقیه، دکتر سید مهدی سادات ، دکتر اعظم بوالحسنی، دکتر شیوا ایرانی
چکیده:   (33 مشاهده)
مقدمه: پروتئین تنظیمی Nef و همچنین  پروتئین های ساختاری MPER و V3 ویروسHIV از اهداف مهم در مطالعات واکسن بشمار می روند. لذا در مطالعه حاضر، پروتئین فیوژن Nef-MPER-V3 در سیستم بیانی پروکاریوتی کلون، بیان شد تا به عنوان کاندید مناسب در مطالعات آتی واکسن مورد ارزیابی قرار گیرد.
روش کار: توالی ژن Nef-MPER-V3  سنتز و توسط آنزیم های NotI /HindIII به داخل وکتور pET-28a کلون شد. سپس، بیان پروتئین نوترکیب در سیستم بیانی BL21(DE3) انجام شد. به منظور بهینه سازی بیان، فاکتورهایی نظیر زمان القاء، غلظت IPTG و دانسیته نوری (OD) مورد ارزیابی قرار گرفت. پروتئ میزان بیان توسط الکتروفورز SDS-PAGE تعیین گردید. سپس، پروتئین با استفاده از ستون  Ni-NTA agarose تخلیص شد و نهایتا، توسط وسترن بلات تعیین هویت  و تایید شد.
یافته ها: ژن هدف با موفقیت در وکتور بیانی کلون و پس از انتخاب بهترین شرایط بیان شامل: غلظت 2 میلی مولار IPTG درکدورت نوری7/0OD600nm= و  بمدت پنج ساعت پس از القاء، پروتئین بیان شده بوسیله کروماتوگرافی تمایلی تحت شرایط دناتوره و با استفاده از اوره  با غلظت حدود 300 میکروگرم در میلی لیتر تخلیص شد. پروتئین فیوژن تخلیص شده بصورت یک باند واضح حدود 35 کیلودالتون در SDS-PAGE مشاهده شد و با استفاده از آنتی بادی ضد Nef در وسترن بلات آشکار شد.
 نتیجه گیری: نتایج ما نشان داد که پروتئین نوترکیب NEF-MPER-V3 در سیستم بیانی BL21 (DE3)  بخوبی بیان شده و پروتئین تخلیص شده قابلیت استفاده در آزمایشات آتی به منظور ارزیابی ایمنوژنسیتی آن در موش که در حال انجام می باشد را دارد.
 
واژه‌های کلیدی: HIV-1 :، Nef-MPER-V3، سیستم بیان پروکاریوتی، بهینه سازی بیان، کروماتوگرافی تمایلی
     
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ویروس شناسی
دریافت: ۱۳۹۸/۶/۱۶ | پذیرش: ۱۳۹۸/۷/۳۰ | انتشار: ۱۳۹۸/۷/۳۰
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

FAGHIH A, SADAT S M, BOLHASSANI A, IRANI S. Cloning, Optimization of Expression Condition and Purification of the Recombinant Nef- MPER-V3 Protein of HIV-1 in Prokaryotic Expression System. jmj. 2019; 17 (2)
URL: http://jmj.jums.ac.ir/article-1-1390-fa.html

فقیه احمد، سادات سید مهدی، بوالحسنی اعظم، ایرانی شیوا. همسانه سازی، بهینه سازی شرایط بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب Nef-MPER-V3 ویروس HIV-1 در سیستم بیانی پروکاریوتی. مجله دانشگاه علوم پزشکی پارس (جهرم). 1398; 17 (2)

URL: http://jmj.jums.ac.ir/article-1-1390-fa.html



دوره 17، شماره 2 - ( تابستان 1398 ) برگشت به فهرست نسخه ها
فصلنامه دانشگاه علوم پزشکی جهرم Journal of Jahrom University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.11 seconds with 32 queries by YEKTAWEB 3991